摘要:肝细胞表面的低密度脂蛋白受体所介导的脂蛋白颗粒吞噬是机体清除循环中低密度脂蛋白的主要途径,在维持体内胆固醇代谢稳态中扮演极其重要的角色。本文简要回顾了低密度脂蛋白受体转运的不同环节,包括内吞、分选、受体分子的降解通道或再循环通道,以及各环节的主要调控因子,总结了相关领域的最新前沿进展。目前,间接靶向低密度脂蛋白受体转录调控的药物开发(他汀类药物)及靶向低密度脂蛋白受体进入降解通道的药物开发[前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)抑制剂]均取得了巨大成功。尽管如此,人们对调控低密度脂蛋白受体转运的分子机制了解尚不完全,特别是对低密度脂蛋白受体的胞内再循环过程及相关的信号传导机制尚需更多研究。因此对这些机制的进一步深入研究可以为发现治疗高胆固醇血症的新靶点提供思路。

摘要:动脉粥样硬化性心血管疾病的发生发展与血浆低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)水平的异常升高密切相关。低密度脂蛋白受体(LDLR)通过介导LDLC的内吞清除,在维持胆固醇稳态中发挥核心作用,而细胞膜表面LDLR丰度与LDLR的表达水平和再循环密切相关。近年的研究发现,RING-E3泛素连接酶可通过双重机制调控LDLR水平:一方面直接泛素化修饰LDLR,促进其经内体-溶酶体途径降解；另一方面通过激活肝X受体(LXR)通路或抑制固醇调节元件结合蛋白(SREBP)核转位,减少LDLR的合成。这两种机制共同导致细胞膜LDLR丰度降低,削弱胆固醇代谢平衡并加剧LDLC蓄积。因此,靶向抑制RING-E3泛素连接酶活性可能成为调控LDLR表达、降低血浆LDLC水平及防治心血管疾病的新策略。该文综述了RING-E3泛素连接酶调控LDLR的作用机制及其相关研究进展。

摘要:前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)是一种主要在肝细胞中表达的分泌型丝氨酸蛋白酶。PCSK9能够与低密度脂蛋白受体(LDLR)结合形成复合物,并通过溶酶体途径使LDLR降解,从而减少细胞表面LDLR的数量,最终导致血浆低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)水平升高。近年来,PCSK9抑制剂成为一个治疗高胆固醇血症及动脉粥样硬化性心血管疾病(ASCVD)药物研发的新热点。目前全球上市了三款PCSK9抑制剂,包括依洛尤单抗(Evolocumab)、阿利珠单抗(Alirocumab)及小干扰RNA药物Inclisiran(Leqvio)。本文对PCSK9的结构、功能、抑制剂的研究进展进行了综述。

摘要:目的 研究前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)在多囊卵巢综合征(PCOS)卵巢颗粒细胞中的表达情况,并探讨PCSK9表达与PCOS卵巢组织以及睾酮处理的KGN细胞中脂质状况的关系。方法 通过来曲唑联合高脂饲料喂养构建PCOS大鼠模型,油红O染色观察PCOS大鼠卵巢组织中脂质分布情况；生物信息学分析筛选PCOS卵巢与正常卵巢转录组数据中参与脂质代谢通路的差异表达基因；采用免疫组织化学和Western blot技术检测PCSK9蛋白在PCOS卵巢组织中的表达情况；采用免疫荧光、qRT-PCR和Western blot技术检测不同浓度睾酮处理的KGN细胞中PCSK9和低密度脂蛋白受体(LDLR)的表达差异；免疫荧光显微镜观察KGN细胞对Dil-LDL的摄取能力。结果 油红O染色结果显示PCOS卵巢组织中颗粒细胞上的脂滴分布较正常卵巢组织明显减少；生物信息学分析结果显示PCOS大鼠卵巢组织中上调的PCSK9主要参与胆固醇代谢通路；免疫组织化学和Western blot结果显示PCSK9蛋白主要定位于颗粒细胞且在PCOS大鼠颗粒细胞中表达增加；免疫荧光、qRT-PCR和Western blot结果显示KGN细胞中PCSK9的表达随睾酮浓度的增加而增加,LDLR的表达随睾酮浓度的增加而减少；睾酮(100 nmol/L)可减弱KGN细胞对Dil-LDL的摄取能力。 结论 PCSK9在PCOS卵巢颗粒细胞中高表达,其可导致LDLR蛋白表达降低,使颗粒细胞脂质摄取不足。

摘要:目的 探讨烟酰胺单核苷酸(NMN)对Huh7细胞胆固醇的调节作用及分子机制。方法 用不同浓度(0、12.5、25、50、100、200 μmol/L)NMN处理Huh7细胞24 h,采用细胞增殖及毒性检测试剂盒(CCK-8)检测NMN对细胞活力的影响；油红O染色观察细胞内脂质蓄积情况；免疫荧光显微镜观察细胞对DiI-LDL的摄取能力；实时定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测细胞内肝细胞核因子1α(HNF1α)、前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)、低密度脂蛋白受体(LDLR)的mRNA和蛋白表达情况。结果 CCK-8实验结果显示,不同浓度NMN处理Huh7细胞24 h对细胞活力没有显著影响；油红O染色显示,LDL加入后细胞内红色脂滴数量随着NMN浓度增加而增多；免疫荧光显微镜观察结果显示,细胞核周红色荧光随着NMN浓度增加而增强；Western blot和qRT-PCR结果显示,100、200 μmol/L NMN使Huh7细胞PCSK9、HNF1α mRNA和蛋白的表达显著降低,LDLR mRNA和蛋白的表达明显升高(P＜0.01)。结论 NMN可能通过介导HNF1α/PCSK9/LDLR信号通路参与调节Huh7细胞的胆固醇代谢,增强肝细胞对LDL的摄取能力。

摘要:目的 探究驱动蛋白超家族成员16B(KIF16B)在低密度脂蛋白受体诱导降解蛋白(IDOL)调节肝细胞摄取低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)中的作用。方法 干扰/过表达IDOL(RNAi/OE-IDOL)的慢病毒感染HepG2和LO2细胞,通过倒置荧光显微镜来观测病毒感染效果；油红O染色观察细胞内脂质蓄积水平；DiI荧光染料标记的LDL(DiI-LDL)摄取实验检测肝细胞对LDLC的摄取能力,流式细胞术检测肝细胞表面低密度脂蛋白受体(LDLR)丰度；Western blot检测IDOL、KIF16B及LDLR蛋白的表达变化,并免疫共沉淀进一步检测蛋白之间的相互作用。结果 两种感染慢病毒的肝细胞内均显示绿色荧光,提示RNAi/OE-IDOL的慢病毒已感染HepG2和LO2细胞；与无慢病毒感染的Control组比较,OE-IDOL组的细胞内脂质含量显著减少(P＜0.05),LDLC的摄取显著减弱(P＜0.05),且肝细胞表面LDLR丰度显著降低(P＜0.01)；RNAi-IDOL组的细胞内脂滴含量显著增加(P＜0.01),LDLC摄取增强,且肝细胞表面LDLR丰度显著增高(P＜0.01)；与慢病毒载体的Control组比较,RNAi-IDOL组LDLR蛋白和KIF16B蛋白的表达升高(P＜0.01),且KIF16B与LDLR的相互作用增强；OE-IDOL组LDLR蛋白和KIF16B蛋白的表达降低(P＜0.05),LDLR与KIF16B相互作用随之减弱。结论 IDOL调节的肝细胞摄取LDLC的过程可能与KIF16B跟LDLR之间存在相互作用有关。

摘要:目的 明确姜黄素可通过下调低密度脂蛋白受体诱导降解蛋白(IDOL)来升高低密度脂蛋白受体(LDLR)的表达水平,从而促进肝细胞摄取低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)。方法 利用过表达IDOL和干扰IDOL慢病毒(OE/RNAi-IDOL)感染HepG2和LO2两种体外培养的肝细胞,倒置荧光显微镜观察病毒感染情况；Western blot检测IDOL及LDLR蛋白表达；油红O染色观察细胞中脂质情况；酶法检测细胞内胆固醇含量；DiI-LDL摄取实验检测肝细胞对LDLC的摄取能力；流式细胞术检测肝细胞膜LDLR分布丰度。结果 与明场比较,暗场下可见胞内呈绿色荧光；与对照组比较,三种不同干扰IDOL慢病毒感染的HepG2和LO2细胞中,仅RNAi-IDOL-2的IDOL蛋白表达显著降低,且相应组的LDLR蛋白表达显著增强(P＜0.01),选择为后续RNAi-IDOL组所用；相反,OE-IDOL慢病毒感染的HepG2和LO2细胞中,IDOL表达显著增高,相应组内LDLR表达减弱；以上结果表明已获得RNAi-IDOL-2及OE-IDOL慢病毒感染的HepG2和LO2细胞模型。与无药物处理的Control组相比,RNAi-IDOL-2及OE-IDOL慢病毒感染的肝细胞内经25 μmol/L姜黄素处理24 h后,油红O染色及胆固醇含量测定结果显示:细胞内脂滴含量和相对胆固醇含量均显著增加(P＜0.01)；且DiI-LDL摄取及免疫流式细胞结果显示:肝细胞摄取LDLC的能力增强(P＜0.01)；肝细胞膜表面LDLR分布丰度增多(P＜0.01)；以上结果与阳性药物对照组的结果趋势一致。结论 姜黄素可以下调肝细胞内IDOL水平,提高细胞膜LDLR分布丰度,从而促进肝细胞摄取LDLC。

摘要:目的 观察姜黄素对人肝癌细胞HepG2脂质摄取的影响是否与驱动蛋白16B(KIF16B)有关,探索姜黄素的降脂机制。方法 (1)将体外培养的HepG2细胞分为对照组(姜黄素浓度为0)和20、30、40 μmol/L姜黄素处理组,CCK8法检测细胞活性,以确定合适的姜黄素药物作用浓度。(2)将体外培养的HepG2细胞分为空白对照组、阴性对照组、瑞舒伐他汀(阳性药物)组和姜黄素组。胆固醇检测试剂盒检测HepG2细胞内胆固醇含量；荧光显微镜观察细胞对DiI标记的低密度脂蛋白(DiI-LDL)的摄取情况；Western blot检测细胞内KIF16B和低密度脂蛋白受体(LDLR)的蛋白表达；激光共聚焦显微镜观察细胞内KIF16B与LDLR荧光共定位情况。结果 25 μmol/L姜黄素不影响HepG2细胞生长。与阴性对照组相比,姜黄素组HepG2细胞内总胆固醇和游离胆固醇水平明显增高,细胞摄取DiI-LDL明显增加,细胞内KIF16B、LDLR蛋白表达显著升高,细胞内KIF16B和LDLR蛋白的荧光共定位显著增加(P＜0.05)。结论 姜黄素作用于HepG2细胞导致的LDL脂质摄取、LDLR表达增加与KIF16B和LDLR的相互作用有关。

摘要:低密度脂蛋白受体相关蛋白6是经典Wnt信号通路的重要受体蛋白之一。该蛋白编码基因的突变与人类多种疾病相关,包括代谢综合征、肿瘤、阿尔兹海默症以及骨质疏松症等。低密度脂蛋白受体相关蛋白6的突变基因形式在临床诊断中亦具有重要的指导意义。本文将围绕低密度脂蛋白受体相关蛋白6的功能及其相关疾病作一综述。

摘要:目的 探讨miR-224-5p对前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)表达及对HepG2细胞摄脂能力的影响。方法 运用生物信息学方法对miR-224-5p基因位置、保守性、种子序列进行分析。在Targetscan、miRanda、miRDB、RNAhybrid等多个数据库分析miR-224-5p与PCSK9结合位点及结合自由能。双荧光素酶报告基因验证miR-224-5p与PCSK9 mRNA 3′UTR直接靶向结合。Western blot检测miR-224-5p模拟物和miR-224-5p抑制剂对PCSK9和低密度脂蛋白受体(LDLR)蛋白的影响。细胞免疫荧光直接观察细胞膜上的LDLR。油红O染色和DiI-LDL分别观察miR-224-5p对HepG2细胞脂滴含量和脂质摄取能力的影响。结果 生物信息学分析发现人的miR-224-5p基因定位于Xq28,不同物种间高度保守。miR-224-5p与PCSK9 mRNA 3′UTR存在靶向结合的基础,结合自由能较低。双荧光素酶报告基因显示,miR-224-5p模拟物能抑制PCSK9-WT 3′UTR荧光素酶活性,而对PCSK9-Mut 3′UTR没有抑制作用,表明PCSK9 mRNA 3′UTR是miR-224-5p的靶点。进一步实验发现miR-224-5p模拟物能够明显抑制PCSK9蛋白表达,增加LDLR蛋白含量。miR-224-5p下调后则表现为PCSK9表达增加,细胞LDLR水平降低。此外,油红O染色可见miR-224-5p模拟物组HepG2细胞内的脂滴明显减少,而miR-224-5p抑制剂组HepG2细胞内的脂滴明显增多。miR-224-5p高表达后明显促进HepG2细胞对LDLC的摄取。结论 miR-224-5p靶向结合PCSK9 mRNA 3′UTR,抑制PCSK9表达,进而降低HepG2细胞内脂滴含量,增加HepG2细胞对脂质的摄取。